ABI7500 Fast Dx 扩增仪标准操作规程核心注意事项：保障安全高效运行的关键要点
在精准医疗和分子诊断领域，结果的准确性与可靠性是生命线。作为荧光定量PCR技术的核心设备之一，ABI7500 Fast Dx 实时荧光定量PCR系统，其性能的稳定发挥高度依赖于严谨的操作规程。理解并严格遵守其标准操作规程(SOP)中的注意事项，不仅是实验成功的基石，更是保障实验室生物安全、数据可信以及仪器长久耐用的关键。忽视任何细节，都可能让珍贵的样本和宝贵的时间付之东流。
🔍 一、 全面周到的实验前环境与准备
- 环境要求是基础： 确保仪器放置在符合要求的环境中至关重要。关注稳定的电源供应（建议使用UPS不间断电源💡），适宜的环境温度（通常10°C至30°C）和湿度（避免过高湿度和冷凝），以及平稳、无强震动干扰的实验台面。避免阳光直射和强气流（如空调出风口正对）。
- 试剂耗材预检不可省： 严格按照实验方案准备试剂，充分混匀并短暂离心，避免气泡。仔细检查PCR板/八联管、光学膜/盖是否完好、清洁、无划痕。确认所有耗材与ABI7500 Fast Dx系统兼容。
- 仪器自检是第一步： 开机后务必耐心等待仪器完成完整的自检程序。留意软件界面的自检状态提示，任何自检错误都必须查明原因并解决后方可进行后续实验。定期（如每次开机或按计划）运行光学校准（Optical Calibration）和背景校准（Background Calibration）是保证荧光信号准确性的关键前置步骤👍。
⚠️ 二、 样品处理与上样：杜绝污染的核心防线
- 样本管理严格分区： 坚定执行PCR实验室的严格分区原则（试剂准备区、样本制备区、扩增/产物分析区）。ABI7500应放置在独立的扩增及分析区。严禁将扩增产物或可能污染的物品带入前区。
- 样本灭活与防泄漏： 处理具有潜在生物危害性的样本时，严格遵守生物安全规范。确保样本在核酸提取后已适当灭活（如适用）。在上样至PCR板/管时，操作需格外小心，避免产生气溶胶或发生液体溅洒、泄漏。实验结束后，立即对可能污染的区域和物品执行去污染程序（如使用含氯消毒剂或专用核酸清除剂）。
- 密封务必可靠： 使用与耗材匹配的光学膜或管盖密封反应体系，确保密封牢固、无缝隙。这是防止运行过程中液体蒸发/污染、以及避免气溶胶污染仪器内部光学元件的核心要求。ABI7500的热盖温度通常设置为95°C或更高，必须保证密封材料能耐受此高温。
- 放置位置精准： 将密封好的PCR板/八联管正确、平稳地放入仪器的样品块（Sample Block）中，确保放置到位。软件中设定的样品位置信息必须与实际物理位置完全一致。
💻 三、 软件操作与程序运行：参数准确是关键
- 程序设置须校对： 在软件中编辑或调用扩增程序（Protocol）时，必须仔细、反复核对所有关键参数：包括反应体积、Stage（步骤）与Step（子步骤）的温度、时间设置、采集荧光的步骤（通常为退火/延伸阶段）、目标基因（Target）与报告荧光染料（Reporter/Dye）的选择（如FAM, VIC等）、以及基线（Baseline）和阈值（Threshold）设置方法（手动或自动）。一处输入错误就可能导致整个实验失败或结果误判。
- 板文件（Plate Document）信息完整： 在运行前，务必在软件中完整设置板文件（Plate Document）信息，准确指定每个孔位对应的样品名称（Sample Name）、任务类型（Task – Unknown, Standard, NTC, NTC等）、检测的目标基因（Detector）以及重复次数。这是后续结果自动分析和报告生成的基础。清晰、规范的命名规则能大幅提高效率并减少混淆。
- 运行中密切监控： 启动运行后，不意味着可以离开。通过软件实时监控仪器运行状态、温度曲线、以及初期产生的扩增曲线是否正常。留意系统是否有任何报错信息（如温度异常、风扇故障、激光错误等）。运行期间避免频繁或剧烈开关仪器舱门（如果适用型号需要开门操作）或触碰仪器。
- 文件保存及时： 实验结束后，立即保存原始数据文件和结果文件（通常为
.sds或.eds格式），按照实验室数据管理规范进行命名和存档。对关键结果进行及时分析或导出备份。
🧰 四、 运行后清洁、维护与校准：仪器长寿命的保障
- 清洁去污是常规： 每次运行结束并取出反应板/管后，务必立即清洁样品块表面。使用无绒布蘸取70-80%乙醇（或其他仪器手册推荐的温和清洁剂）轻轻擦拭，去除可能的冷凝水、灰尘或残留物，保持样品块清洁干燥。严禁使用强腐蚀性或磨蚀性清洁剂。定期检查并清洁仪器外观及通风口。
- 定期维护要执行： 严格遵守制造商建议的预防性维护计划。这通常包括定期更换关键耗材（如HEPA过滤器，用于保障仪器内部空气洁净、防止光学元件污染）、清洁光学部件（需专业人员或按严格指南操作）、以及执行全面的仪器校准（如季度性或年度性光电倍增管PMT增益校准）。详细记录维护时间和内容。
- 耗材流转需管理： 建立实验室内部的耗材（特别是易损件如HEPA滤网）库存管理，确保备件充足，及时更换， 避免因耗材短缺影响仪器使用。
🧤 五、 安全防护：贯穿始终的原则
- 个人防护到位： 操作仪器及处理样本/试剂时，始终佩戴符合要求的个人防护装备（PPE），如实验服、手套（推荐双层，尤其是处理潜在传染性样本时）、护目镜或面罩。
- 生物安全意识强化： 深刻认识到PCR扩增产物是高浓度的潜在污染源。所有接触过扩增产物的耗材（如枪头、废液缸、PCR板/管等）必须作为生物危险废弃物处理。在操作区域丢弃前，务必进行彻底的去污染处理（如高压灭菌或使用有效消毒剂浸泡）。牢记 “预防胜于补救” 的污染控制铁律。
- 遵守实验室规程： 严格遵循所在实验室制定的各项安全规章制度、废弃物处理流程和应急预案。